Halofilik arke kaynaklı amilaz enziminin saflaştırılması

---

Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Hatay Mustafa Kemal Üniversitesi, FEN BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ, KİMYA (YL) (TEZLİ), Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2011

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: FETHİYE GANİMGİL

Danışman: GÜL ÖZYILMAZ

Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu

Özet:

Bu çalışmada ekstraselüler halofilik arke kaynaklı amilaz enziminin izolasyonu ve karakterizasyonu gerçekleştirilmiştir. Bu amaçla kullanılacak ekstraselüler halofilik arke izolatının seçimi amilaz aktivitesine göre yapılmıştır. Amilaz enziminin saflaştırılmasında sırasıyla diyaliz, konsantratör ile deriştirme, kalsiyum alginatla biyoseçimli izolasyon ve DEAE-Sefadeks iyon değiştirici kromatografisi teknikleri kullanılmıştır. Amilaz enzimi, kalsiyum alginat ile kısmen izole edildiğinde spesifik aktivite 5.115 U/mg protein olarak bulunmuş ve bu aşamada enzim 77.5 kat saflaştırılmıştır. DEAE-Sefadeks iyon değiştirici kromatografisi ile yapılan bir sonraki saflaştırma basamağında ise amilaz enziminin spesifik aktivitesi 10.00 U/mg prot. olarak bulunmuş ve enzim bu basamakta 151.52 kat saflaştırılmıştır. Çalışmada saflaştırılmış halofilik arke kaynaklı amilaz enziminin en yüksek aktivite gösterdiği pH, sıcaklık ve NaCl derişimleri belirlenerek karakterizasyonu da yapılmıştır. Buna göre seçilen A-235 izolatından elde edilen amilaz enziminin optimum pH, sıcaklık ve NaCl derişimi sırasıyla pH 5, 50 ºC ve 3 M NaCl olarak belirlenmiştir. Bu koşullarda farklı derişimdeki nişasta derişimlerine bağlı olarak aktiviteler belirlendiğinde Km ve Vmax değerleri ise Lineweaver-Burk denklemine göre sırasıyla 4.1 mg nişasta/mL ve 0.42 mg nişasta/dk.mL olarak hesaplanmıştır.