Halofilik arke kaynaklı lipaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu

---

Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Hatay Mustafa Kemal Üniversitesi, FEN BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ, KİMYA (YL) (TEZLİ), Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2013

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: TANJU YILDIZ

Danışman: GÜL ÖZYILMAZ

Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu

Özet:

Bu çalışmada halofilik arke kaynaklı ekstraselüler lipaz enziminin izolasyonu ve karakterizasyonu gerçekleştirilmiştir. Halofilik arke suşlarının seçimi lipolitik aktivitelerine göre yapılmıştır. Seçilen suşlar, A-206 ve B-49 olarak sembolize edilmiştir. Suşlar %25 NaCl içeren SG broth besi ortamında üretilmiştir. En yüksek lipaz aktivitesi B-49 ve A-206 için sırasıyla 4 ve 5. üreme günlerinde elde edilmiştir. Ekstraselüler lipaz çözeltisi besi ortamının sırasıyla santrifüj, diyaliz ve deriştirilmesi ile elde edilmiştir. Lipaz enzimi saflaştırılmasında (NH4)2SO4 ile fraksiyonlu çöktürme, aseton ile fraksiyonlu çöktürme, Fenil-Sefaroz hidrofobik etkileşim kromatografisi ve DEAE-Sefadeks iyon değiştirici kromatografisi teknikleri kullanılarak saflaştırılmıştır. Enzimin saflığını kontrol etmek amacıyla saflaştırma aşamalarının herbirinin sonunda SDS-PAGE analizi yapılmıştır. Uygulanan teknikler kıyaslandığında, en yüksek oranda saflaştırmanın DEAE-Sefadex iyon değiştirici kromatografisi tekniği kullanıldığında B-49 suşuna ait lipaz enziminin 3,58 U/mg spesifik aktivite ile 62,81 kat; A-206 suşuna ait lipaz enziminin 4,49 U/mg spesifik aktivite ile 28,42 kat daha saf izole edildiği belirlenmiştir. Suşlara ait lipaz enziminin pNPB ve pNPA substratları için karakterizasyonu yapılmıştır. DEAE-Sefadeks iyon değiştirici ile elde edilen halofilik arke lipaz fraksiyonları pNPA ve pNPB substartları için karakterize edilmiştir. Optimal çalışma koşulları araştırılmış ve her iki kaynak ve subsrat için pH (6,0-7,5), sıcaklık (40 º) ve NaCl derişimleri (3,0-3,5 M) belirlenmiştir. Ayrıca Ea (28,3-84,7 kJ/mol.K), enzimlerin denatürasyonunun başladığı sıcaklık (40-43 ?C), Km (3,81-7,16 mM) ve Vmax (7,93-65,47 U/mg) değerleri B-49 ve A-206 ve iki substrat için hesaplanmıştır